1、 標本的固定:不當?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r溫度過高,都會影響到所檢測的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。查看一抗說明書或相關(guān)文獻,使用推薦的固定液(如10%中性緩沖福爾馬林固定液等)。
2、抗原的修復方式:煮沸修復和高壓修復是國際公認的較好的修復方式,但具體使用那種修復方式應根據(jù)預實驗結(jié)果或廠家說明書進行選擇。
3、抗體的稀釋度是否過高或者孵育的溫度/時間是否正確。應參照使用范圍,對所使用的一抗進行梯度測試,找出最佳的使用濃度。通常,如果背景染色很少或沒有,可適當延長孵育時間。
4、切片上遺留了過多的沖洗液,當抗體加至切片上時,等于人為地對抗體進行了進一步的稀釋。
5、 孵育時切片是否放置水平,否則會導致抗體流失。